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[Biowest] 드림이가 알려주는 Biowest FBS 이용 팁! 上편

학술부 2021-04-06 16:44:49 조회수 42

내용의 원본은 링크를 통해 확인이 가능합니다.

 

 

 

 

 

 

드림이가 알려주는 Biowest FBS 이용 팁!

 


 

 

WHAT IS THE BEST WAY TO THAW SERUM?

Serum은 2-8°C에서 해동하여 열화를 방지한다; 그 대신에 상온에서 주기적으로 섞어줍니다.
Serum을 장기간 가열할 경우, 성장 촉진제가 파괴되어 침전물을 형성할 수 있습니다.
37°C 이상의 온도는 주요 혈청 인자의 저하를 가속하여 Serum의 성능을 저하시킬 수 있으므로 주의해야 합니다.

Serum을 해동시킬 때, 저어주는 것은 Serum의 품질을 좋게 하는데 매우 중요한 역할을 합니다.

만약 Seurm이 정확히 혼합되지 않는다면, 소금, 단백질, 지질 등의 침전물이 발생할 것입니다.

이러한 침전물은 세포 배양에 독성이 발생하지는 않으나, Serum의 모양과 제품의 일관성에 영향을 미칩니다.
Serum을 장기간 가열할 경우, 성장 촉진제가 파괴되어 침전물을 형성할 수 있습니다.

 

 

 

 


WHAT ARE THE PRECIPITATES IN THE SERUM?

Serum 해동 후 또는 장기 동결 및 냉동 후에 탁도 및 휘발성 물질이 보일 수 있습니다.
37°C에서 장기간 incubate된 Serum이 색이 뿌얘지고, 침전물이 발생할 수 있습니다.

이렇게 발생한 침전물들은 칼슘과 인으로 구성되어 있습니다.

이것은 세포 배양에서 Serum의 성능을 변화시키지 않습니다.

 

침전물의 발생 원인

*발생원인 1. Fibrin
Serum의 채취 절차 및 급속 냉동으로 인하여 혈청 내에 fibrinogen이 남아있을 수 있습니다.

Fibrinogen은 응고 형성 단백질인 fibrin의 수용성 전구체로, fibrin이 해동 혹은 heat inactivation 후에 발생할 수 있습니다.

Fibrin은 세포 성장을 촉진하기 위해 serum 성능에 영향을 끼치지 않습니다.

이러한 침전물이 발생하더라도 필터링 혹은 원심분리 없이 FBS를 이용하는 것이 좋습니다.

 

*빌생원인 2. Calcium Phosphate
37°C에서 장기간 incubate된 Serum이 색이 뿌얘지고, 침전물이 발생할 수 있습니다.

이렇게 발생한 침전물들은 칼슘과 인으로 구성되어 있습니다.

이것은 세포 배양에서 Serum의 성능을 변화시키지 않습니다.

 

 

 

 


IS IT NECESSARY TO HEAT INACTIVATE SERUM?
대부분의 Cell culture application에서는 Serum의 heat inactivation을 권장하지 않습니다.

Heat inactivation은 면역학적 측정을 방해할 수 있는 단백질을 발생시킵니다.

Serum을 장기간 가열하면 성장 인자를 감소시키거나 파괴할 수 있을 뿐만 아니라, 일반적으로 미생물 오염으로 오해되는 침전물의 형성을 증가시키기도 합니다.

 

 

 

 


HOW SHOULD THE SERUM BE HEAT INACTIVATED?
만약, Heat inactivated를 진행하고 싶다면, 아래와 같은 방법으로 진행하기를 추천합니다.

 

                                                                     1. 먼저 2-8°C에서 Serum과 control serum을 녹여줍니다.
                                                                     2. 해동 중에 침전물이 발생하지 않도록 병에 든 세럼을 저어준 후,  80°C로 조절된 Water bath에 옮겨줍니다.
                                                                     3. 컨트롤 병(bottle) 온도가 50°C에 도달하면 Water bath의 온도를 70°C로 조정합니다.

                                                                           병 온도가 55°C에 도달하면 온도를 60°C로 변경합니다.
                                                                     4. Serum이 56°C의 온도에 도달하면 타이머를 30분으로 설정하고 Water bath의 온도를 56°C로 변경합니다.

                                                                           30분 동안 정기적으로 온도를 확인하고 온도 조절기를 조정하거나,

                                                                           찬물을 약간 넣은 후 뚜껑을 덮는 등의 방법으로 온도를 안정적으로 유지합니다.

                                                                           단, 5분에서 10분마다 세럼을 흔들어주세요.
                                                                     5. Serum은 상온에서 30분간 보관한 후 -20℃에서 동결합니다.