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학술정보

[IHC] Immunohistochemistry(면역조직화학) 버퍼

드림셀 2023-02-14 조회수 543

IHC Buffer 레시피

Sample Fixation Buffers

Zenker’s Solution

*가열 후 식힙니다. 사용 직전에 아주 차가운 acetic acid 5ml를 첨가합니다. Zenker Solution에 고정된 조직을 다룰 때는 금속 forceps(겸자)를 사용하지 마십시오. 
비장 및 결합 조직과 같은 혈액이 많은 검체에 이상적으로 사용됩니다.

Helly Solution


*가열 후 식힙니다. 사용 직전에 formaldehyde 5ml를 첨가합니다. 골수, 간, 비장과 같은 혈액 생성 기관에 사용됩니다.

Bouin’s Fixative


*Soft tissue의 구조를 보존하는데 이상적입니다.

Carnoy’s Solution


*DNA 및 RNA 고정에 이용됩니다.

Zinc Formalin

1. 0.1M Tris Buffer(pH 7.4)를 만듭니다.


2. Zinc Fixative를 준비합니다.


* 잘 용해되도록 혼합합니다. 최종 pH가 6.5-7.0이 되도록 조정합니다. Fixative reagnet는 실온에 보관합니다.

4% Formaldehyde Fixative Solution

1. pH 7.4인 0.2M Phosphate Buffer(PBS)를 만듭니다.


2. 이것으로부터 0.1M Phosphate Buffer(pH 7.4)를 만듭니다.


3. 4% Paraformaldehyde in 0.1M Phosphate Buffer를 만듭니다.


* 용액을 저어주면서 60-65℃까지 가열합니다. 1N NaOH를 용액이 투명해질때까지 몇방울 가합니다. 용액이 용해될때까지 계속 저어줍니다. 식힌 후 필터로 걸러줍니다.

10% Neutral Buffered Formalin


* 10% formalin은 실제로37-40% stock solution의 10%에 해당합니다. 그러므로, 10% formalin에 용해된 실제 formaldehyde의 양은 단 3.7-4.0% 입니다.

Buffers for heat-induced epitope retrieval (HIER)

Sodium Citrate Buffer (10 mM Sodiem Citrate, 0.05% Tween 20, pH 6.0)


* 1N HCL을 이용하여 pH를 6.0으로 맞춥니다. 실온에서 3개월까지 보관 가능하며, 장기간 보관하기 위해서는 4℃에 보관합니다.

1 mM EDTA, pH 8.0


* NaOH로 pH를 8.0으로 맞춥니다. 실온에서 3개월까지 보관가능합니다.

Trsi-EDTA buffer (10mM Tris base, 1 mM EDTA solution, 0.05% Tween 20, pH 9.0)


*pH를 9.0으로 맞춥니다. 실온에서 3개월까지 보관 가능하며, 장기간 보관을 위해서는 4℃에 보관합니다.

Enzymatic antigen retrieval을 위한 buffer

Trypsin Buffer

1. Trypsin stock solution(0.05%)를 만듭니다.


* -20℃에 보관합니다.

2. 1% Calcium Chloride Stock Solution를 만듭니다.


* 4℃에 보관합니다.

3. Trypsin working solution (0.05%)


*NaOH을 이용해 pH7.8로 맞춥니다. 4℃에서 한달간 보관 가능하며, 장기간 보관시 -20℃에 보관합니다.

Permeabilization Buffers

Tripton 또는 NP-40

PBS에서 0.1-0.2%를 10분간만 사용합니다.

*Nuclear antigen staining에서 핵막을 부분적으로 용해시킬 수 있습니다.

Tween 20, Saponin, Digionin 및 Leucoperm

0.2-0.5%를 10-30분간 사용합니다.

* cytoplasmic antigen 및 soluble nuclear antigen에 적합합니다.

Blocking Buffers

Peroxidase Blocking Solution (3% H202 in PBS)


* 4℃에서 3개월까지 보관가능합니다. Paraffin section에 추천되는 solution입니다.

Peroxidase Blocking Soluiton (0.3% H2O2 in Methanol)


* 4℃에 보관합니다. Frozen section에 추천됩니다.

Biotin blocking buffer

Biotin 0.001% in PBS.

* 4℃ 보관

Blocking Sera Sample Buffer Recipes

Normal Rabbit Sera blocking buffer


* 4℃ 보관

Universal Blocking Buffer


* 4℃ 보관. Sodium azide는 HRP의 inhibitor이므로, HRP conjugated antibody를 희석하는데 사용하지 않습니다.