인류의 건강과 생명공학 발전을 위해 봉사하는 기업 드림셀
We Serving the Health and Biotechnology of Humanity
홈 > 자료실 > 뉴스레터
뉴스레터
[IPHASE] N-니트로사민(Nitrosamines,NDSRIs) : 햄스터 간 S9를 사용한 강화 된 에임스 테스트
드림셀
2025-03-21
조회수 70
안녕하세요 IPHASE 공식 대리점 드림셀입니다.
드림셀에서 IPhase의 Nitrosamines(NDSRIs)를 소개해드립니다.
아래의 뉴스레터에서 자세한 내용을 확인해 보세요!
궁금하신점이 있다면 아래로 연락 부탁드립니다
Tel | 02-2292-8870 E-Mail | dreamcell@dreamcell.co.kr
Keywords
N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames test, Hamster liver S9, Cytochrome P450 enzymes, Mutation Test
iPHASE 제품
|
제품 이름 |
사양 |
|
35mg/ml, 1ml |
|
|
35mg/ml, 1ml |
|
|
5ml*32 테스트 |
|
|
100/150/200/250 요리 |
|
|
6well24/ 6well40 |
|
|
1696 웰스/
4384 우물 |
|
|
잘 |
|
|
20ml*36 테스트 |
|
|
20ml*36 테스트 |
|
|
5ml*30 테스트 |
|
|
20/50 테스트 |
N-니트로소아민(NDSRIs)이란?
N-니트로소아민(NDSRIs)은 화학식 R1(R2)N-N=O를 가지며, 다양한 메커니즘을 통해 생성됩니다. 이들은 주로 다음과 같은 반응으로 형성됩니다 :
- 2차 아민과 아질산의 반응
- 3차 아민과 모노클로라민의 반응
- N,N-디메틸포름아마이드(DMF)의 산화
- 고무 가황제 및 질소산화물의 작용 등
N-니트로소아민은 자연과 음식에서 광범위하게 발견됩니다. 공기, 물, 토양뿐만 아니라 베이컨, 주류 등의 식품에서도 검출되며, 의약품 생산 과정에서도 생성될 수 있습니다.
NDSRIs는 유전독성을 가지며, DNA 손상을 유발하고 암을 일으킬 수 있습니다. 이들의 위험성은 복용량과 관계없이 매우 낮은 농도에서도 피해를 일으킬 수 있습니다. 국제 암연구소(IARC)는 다양한 N-니트로소아민을 발암물질로 분류하였으며, N-디메틸니트로소아민(NDMA)과 N-디에틸니트로소아민(NDEA)은 2A군(인간에게 발암 가능성이 높은 물질)으로, 기타 N-니트로소아민은 2B군(발암 가능성이 있는 물질)으로 분류되었습니다.
또한, 국제의약품규제조화위원회(ICH) M7 가이드라인에서는 발암 위험성이 높은 NDSRIs를 1등급(Class I) 불순물로 분류하여 엄격한 관리가 필요하다고 규정하고 있습니다. NDSRIs의 발암성은 대사산물에서 기인하며, α-하이드록실화 가설에 따르면, NDSRIs는 효소에 의해 활성화되어 발암성 중간체를 형성하며, 이는 DNA 염기 알킬화를 유도하여 암을 촉진합니다.
NDMA의 발암성 메커니즘
NDMA의 발암성 메커니즘은 α-하이드록실화
반응을 통해 활성 중간체가 형성되고, 이 과정에서 DNA 염기와
반응하여 돌연변이를 유발하는 방식으로 설명됩니다.
NDSRIs 불순물의 유전독성 평가: 강화된 Ames 테스트(Enhanced Ames Test, EAT)
Ames 테스트(Bacterial Reverse Mutation Assay, 복귀돌연변이시험)는 1975년 미국의 생물학자 브루스 에임스(Bruce Ames) 가 개발하였으며 유전독성 평가에 표준 방법 중 하나로 활용되어 왔습니다. 이 시험은 물질의 돌연변이 유발 가능성과 발암성을 평가하는 초기 선별 검사로 사용됩니다.
그러나 유럽의약품청(EMA)의 최신 지침에 따르면, 기존 Ames 테스트는 NDMA와 같은 특정 N-니트로소아민 불순물의 돌연변이성을 충분히 감지하지 못할 가능성이 있습니다. 이에 따라, 미국 식품의약국(FDA) 산하 국립독성연구센터(NCTR)에서 개발한 강화된 Ames 테스트(Enhanced Ames Test, EAT)가 보다 신뢰할 수 있는 대안으로 권장되고 있습니다.
Enhanced Ames 테스트 적용 기준
- 기존 Ames 테스트 결과가 양성(Positive) 인 경우: 강화된 Ames 테스트 필요 없음
- 기존 Ames 테스트 결과가 음성(Negative) 인 경우: 강화된 Ames 테스트 필수 수행
- 강화된 Ames 테스트에서도 음성 인 경우: 추가적인 생체 내(in vivo) 돌연변이 시험 필요
- 생체 내 시험에서도 음성 인 경우: 전문가 검토 필수
특정 N-니트로소아민 불순물은 돌연변이성을 나타내지 않더라도 발암성을 가질 수 있으므로, 위험성 평가 시 세밀한 검토가 필요합니다.
Enhanced Ames 테스트 (EAT) 조건
1. 시험 균주
- 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium) TA98, TA100, TA1535, TA1537
- 대장균(Escherichia coli) WP2 uvrA (pKM101)
2. 시험 방법 및 전처리 시간
- 전처리(pre-incubation) 방법 및 Non-flat bedding method 사용
- Pre-incubation 시간: 30분 권장
3. S9 (Liver) 타입 및 농도
- 30% rat liver S9 및 30% Hamster liver S9 사용
- S9는 Cytochrome P450 Enzyme-inducing substrates로 처리된 설치류(랫, 햄스터)의 간에서 추출하여 제조
4. Negative (solvent/excipient) Control
- 시험에 사용되는 용매(solvent)는 Ames 테스트 지침에 적합해야 하며, 사용 가능한 용매는 다음과 같습니다. ①물 (Water), ② 유기 용매: 아세토니트릴(Acetonitrile), 메탄올(Methanol), 디메틸설폭사이드(DMSO) 등
- 유기 용매 사용 시, 시험 혼합물 내 최소량을 사용해야 하며, N-니트로소아민의 대사 활성화에 영향을 주지 않아야 함을 입증해야 합니다.
5. Positive Control
- OECD 471 지침에 따라, 균주별로 특정 양성 대조군을 사용해야 합니다.
- S9가 포함된 시험에서는 돌연변이성이 입증된 두 가지 N-니트로소아민(NDMA, 1-cyclopentyl-4- nitrosopiperazine)을 양성 대조군(positive control)으로 사용합니다.
기타 모든 Ames 시험 조건은 OECD 471 지침을 준수해야 합니다.
IPHASE 관련 제품
IPHASE는 체외 유전독성 연구를 위한 생물학적 시약 분야의 선도 기업으로, 최신 장비와 전문 연구진을 보유하고 있으며, 다년간 연구 개발 경험을 쌓아 왔습니다.
- 유도된 SD Rat Liver S9 개발 성공 이후, 세계 최초로 유도된 Hamster (Golden Syrian) liver S9 (Hamster Liver S9)을 개발하였습니다.
- 무균 검사, 대사 활성 시험, Ames 테스트 및 염색체 이상 검사 등 품질 검증을 통해 SD Rat Liver S9와 유사한 성능을 나타냄을 확인하였으며, 체외 유전독성 시험(in vitro genotoxicity test) 기준을 충족합니다.
- 현재, IPHASE는 Genotoxicity Ames Kit, In Vitro Chromosome Aberration Kit 등의 체외 유전독성 연구를 위한 다양한 제품을 제공하고 있습니다.
IPHASE 회사 소개
IPHASE는 지속적인 연구 개발 경험을 바탕으로 다양한 과학 연구 분야에서 다양한 연구 시약을 출시하였으며, 초기 신약 개발, 신소재 연구 및 생명과학 연구을 위한 혁신적인 제품을 제공합니다. 식품, 의약품 및 화학물질의 유전독성 연구를 위한 솔루션을 지원합니다.